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2011-03-15
1 实验所需要的仪器: LC—10A液相色谱仪(日本 岛津)。紫外检测器(SPD—IOA)。DT一100分析天平。清热止咳糖浆共 5批号。黄芩苷对照 品(中国药 品生物制品检定所)。试剂均为分析纯。
2 测定条件 色谱柱 Hypersll ODS柱 (250mm×4 Omm,5,um);流动相:乙腈一甲醇一O 2% P04(10:35:55);检测波长 :28Onto;流速1 Oral/rain;柱温 :室温 ;进样量 :20tA。
3 样品制备
3.1 供试品液的制备 精密量取 清热止 咳糖浆 样品 lml。置 lOOml量瓶中,加水至刻度,摇匀 。用 0.451~m微孔滤膜滤过 ,进样。
3.2 对照品溶液的制备 取对照 品黄芩 苷适量 。加流 动相配制成 0.1mg/ml对照品溶液 ,进样。
3.3 空白样品的制备 量取缺 黄芩 药昧 的空 白样品 1m1.置 lOOml量瓶中,加水至刻度,摇匀 用 0.45/~m微孔滤膜过滤 ,进样。
4 测定方法与结果
4.1 色谱图 黄芩苷的峰保 留时间约为 5.9rain;黄芩苷与其相邻峰的分离度大于2;以黄芩苷峰计算理沦板数约7000,清热止咳糖浆中其它成分对黄芩苷的含量测定没有影响 ;空白样 品无干扰 。
4.2 线性 关系 精密称取黄芩苷对照品 27.60rag置于 5Oral量瓶中,用流动相溶解定容作 为储备 液,精 密吸取 1、2、4、6、8rnl各置于 lOml的量瓶中用流动相稀释定容。进样20t~l。以峰面积积分值为纵坐标,浓度为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得 回归方程为 Y=40537.5X一107.87,r=0.99995(rl 5),表明黄芩 苷浓度在 55.4—44l_8 ml范 围内线性关系良好
4.3 精密度试验 取浓度为200.8 g/ml的黄芩苷对照液 2 l连续进样 5次。结果:黄芩苷峰面积积分值的 tlSD为0.55%(n 5)。
4.4 回收率试验 分别 量取 已知含量 的样品 0.5ml,置于 100ml量瓶中,精密加入黄芩苷对照品4.8、4.9、6.0、6.2、7.2、7.3rag。用蒸馏水溶解井稀释至刻度、摇匀。用O.45”m的微孔滤膜过滤,进样,结果加样回收率 10335%(RSD=0.84%,n=6)。
4.5 重现性试验 取同一批号样品(040208)5份,分别按样品测定法测定。测定5次,测得平均含量为 l3.55%mr./ml,RSD=0.43%。
5讨论 黄芩是清热止咳糖浆中的主药,黄芩苷是黄芩中的主要成份,因此测定黄芩苷含量可作为质控的一个重要指标。本实验采用 HPLC测定清热止咳糖浆中黄芩苷的含量。色谱分析十分理想,结果准确。由于样品是水溶液,所以直接用水稀释进样即可。流动相加人乙腈能使色谱峰峰形巫加尖锐,分离度也更好,而且流动相的酸度降低,减少了对柱的损坏。
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