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液相色谱仪分离测定尿中肌酐和尿酸成分

2011-03-01

1 实验部分

1I 仪器和试剂:液相色谱仪 51o型输液泵及 U6K进样器(Waters 司,美国SPD-2A型紫外检测日本 岛津3O66型笔式记 录仪重庆仪表总厂  色谱柱 150nx4 6n不锈钢柱填充本室台成的聚氧乙烯交联  氨基丙基固定相(5  。尿酸(Slg~ 公司和肌酐 (Merck 均为生化试剂 ,实验用水 为二次蒸馏水 ,其它试 剂为分析纯。流动相用耐酸玻璃砂漏斗  过滤并脱气

12 标准溶液的制备 肌酐和尿酸标准储备渡(1 gL)按文献方法制备 ,可在冰箱中保存一个月。肌酐和屎酸标 准溶液及混台标准溶液(1 r  L):取适量体积的相应标准储备液 ,用水稀释至所需浓度 ,使用前新鲜配制

13 分析条件 流动相 0ol radL磷酸盐缓冲溶液 10%甲醇,pH=481。流速 1 mIJmin。检测波长 235 ran灵敏度 016 Atrrs(输出电压 10 mY)。色谱分析温度为室温,以溶剂峰测定死时间。

14 定性测定方法 采用外标法 ,以峰高定量。

2 结果与讨论

21 检潮波长的选择 220 280-皿波长范围测定肌酐和尿酸的紫外吸收,两物质均在 235 有高吸收故确定检测波长 235 IlIn

22 流动相的选择 因分析 Ig标为尿中肌酐和尿酸 ,所以选择流动相含 001 radL磷酸盐缓冲液,使分析条件较温和。考察不同 pH的流动相对两物质分离的影响 ,在 pH=481附近,肌酐和尿酸分 离度好。流动相中甲醇浓度对分离也有影响,选择 10%的甲醇含量时,两物质有好的分离度。在所选择的分析条件下 ,无杂质峰干扰肌酐和尿酸的检测。

23 工作 曲线、检测限及线性范 将不 同浓度的标准溶液分别进样 ,进样体积 10  ,以峰高对进样量坞作线性回归如下 :肌酐 y229+16175z,相关系数 r= 10000;屎酸 Y=414+1728 z,相关系数 r09999。用逐级稀释法,在 002AUFS ,按信噪 比为 3倍计测得检测限 :肌酐,2  L-尿酸 3  Lo线性范围肌酐 21×1  L;屎酸 31×1  Lo

24 回收辜及 密度  同量 的肌 和屎 酸标 准溶 液加 人稀 的尿样 作色谱 ,回收率 :肌酐1020 RSD=300go(n=8);尿酸,9627 RSD=197(n8)

25 品测定 取正常人新鲜屎样用水稀释 10 ,进样 2  ,对 8份尿样进行分析,每份平行测定 35R <6%。样品攫I定结果:肌酐,078177 gL;尿酸 0280 63 k 样品测定结果与文献报道的正常范围相符 ,色谱分析时问不超过 6 ndn

 

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