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1200液相色谱仪检测人血浆中的局部麻醉剂

点击次数:1356 发布时间:2011-02-28

1 仪器与试剂

1200液相色谱仪系列,由 G1312A液相泵、G1316A柱温箱、G1315B二极管阵列检测器、7725手动进样阀和25  微量进样器组成;HJ2磁力加热搅拌器;PHS 3C型酸度计。利多卡因、布比卡因均为盐酸盐注射液,丁卡因为盐酸盐粉末。乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水。含盐酸利多卡因、盐酸布比卡因和盐酸丁卡因的标准储备液及由其稀释而成的标准溶液均置于4cc冰箱中保存。

健康人血浆从湖南中心血站购得冰箱中一4O℃冷冻保存不超过 3星期,含利多卡因、布比卡因和丁卡因的加样血浆于4℃冰箱中保存,保存时间不超过 24 h。病人血样来自长沙市第四医院,病人首先被一次性注入布比卡因 109 mg(腰麻,然后在 05 h内分 4次注入利多卡因,累计量为2829 mg (硬膜外麻醉,从实施麻醉开始计时,2 h进行*次采样,7 h进行第二次采样。 局部麻醉剂的标准溶液 、加样血浆溶液及病人血浆溶液,以01 molL NaOH溶液调节 pH值至 1 1,作为本实验的料液。

21 色谱条件

色谱柱:Spherigel C (5 Ixm150 mm×46 mm id)(大连江申分离科学技术公司,流速为

1.0          mLmin,检测波长为210 nm,进样量为 1 IxL;流动相:750 mL 0025 molL三乙胺水溶液,以磷酸调pH 30,用 045 Ixm滤膜过滤,与 250 mL乙腈混匀,脱气 10 min备用。

22 实验方法

液.液.液微萃取体系含料液相、有机相和接受相 3个液相如图1)。在萃取瓶中加入一个微型搅拌磁子和 1 mLpH l10的料液,缓慢加入200 IxL苯,再用25  微量进样器抽取 ILL02 molL的盐酸溶液,微量进样器固定在铁夹上,其针尖浸入到有机溶剂中,

小心按下微量进样器的活塞,使反萃相在有机相中形成一个小液滴悬挂在针尖上。开启搅拌器,搅拌速度为 250 rmin,萃取 45 min后,将反萃相小心抽回进样器,直接进样到液相色谱体系中进行分析。以萃取结束后分析物在接受相中的浓度和萃取开始前分析物在料液相的初始浓度之比计算富集因子。

31实际血样的检测

标准混合溶液的色谱图和加样血浆经过液一液一液微萃取后的色谱图分别见图4(A)和图4(B)。由图4(A)和图4(B)可知,局麻药通过 LLLME后得到了很大程度的富集。以此为依据,本实验在优化条件下,对实际病人的血样进行了测定,图4(c)和图4(D)分别是实施利多卡因、布比卡因麻醉7 h时的病人血浆直接进样的色谱图和其 LLLME色谱图。由图4(c)可知,由于病人血样复杂,且局麻药的浓度较低,无法直接进行测定。比较图4(D)和图4(c)可知,LLLME可以消除血浆本身对局麻药检测的干扰,且局麻药的浓度经微萃取后得到了明显富集。测得2 h后所采血样中的利多卡因浓度为106 mgL,布比卡因浓度为022 mgL7 h后所采血样中的利多卡因浓度为028 mgL,布比卡因浓度为006 mgL

说明该 LLLMEHPLC方法消除干扰能力强,灵敏度高,可以用于实际血浆样品中局麻药的测定。

 

 
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