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液相色谱分离柱的使用与维护方法

2011-02-24

在前述仪器工作原理部分,我们已经指出,液相色谱仪的分离是在色谱分离柱中实现的。我们目前工作中多采用反相色谱柱 ,如何保护好分离柱减少柱的污染是延长柱寿命的关键。

3.1          怎样维护好色谱分离柱

加保护柱预柱是保护分离柱的有效办法。保护柱是根内装填料与分离柱性质相近的短柱,接在分离柱之前,或代替流路过滤器。保护柱的作用是收集和阻塞分离柱 口的化学垃圾 ,这些垃圾如果直接进入分离柱会逐渐堆积在柱头,更终降低柱效能。保护柱是消耗品,如分析血浆样品,一般分析 50个样品后需更换新柱芯。避免高压冲击分离柱。一般色谱柱都能承受得起高压,但经不住突然变化的高压冲击,这将改变柱床体积,影响柱效。引起高压冲击的原因主要有:进样器的样品阀的缓慢转动、泵启动太快、柱切换等操作。用手动进样阀时的压力变化不大 ,自动进样阀由于切换较慢,可能会造成压力冲击。合理选择分离柱。我们知道,选择色谱分离柱主要根据两点,一是根据待测组分的分子量的大小;二是根据流动相条件,包括 PH值、离子强度和溶剂极性等。传统硅胶基质的键合相柱要求流动相 PH值在 37之间, PH (>8)的流动相能溶解硅胶,使键合相流失。而目前利用先进的杂化颗粒技术研制的高纯硅胶颗粒填料 Waters公司的XTerra色谱柱,集硅胶和多孔聚合物填料的优点为一体,使有机硅烷单元取代了相当一部分占据颗粒内部和表面位置的硅羟基,使这种新型填料具有分辨率高、稳定性强、PH范围宽(112)的优势,其性能突破了传统液相色谱柱的极限。所以一定要根据分析的对象、流动相的条件选择合适的分离柱,茫然时可向公司的技术人员咨询。 定期冲洗分离柱。每次分析工作结束时,冲洗完缓冲盐后 ,更后要过度到用强溶剂冲洗柱子 ,如可用色谱纯甲醇、乙腈冲洗反相 C18柱,目的是冲去吸附在柱的强保留组分。如果用甲醇 /水为流动相也应这样冲洗柱子,在一定程度上可恢复柱效。

32 怎样减少柱的污染?

更有效的办法是纯化样品。我们在多年的分析工作中发现,凡是样品纯化的越干净,分离柱的寿命就越长反之,只有提取没有纯化的样品,分离柱柱效下降较快建立一个理想的色谱分析方法应该有一套有效的样品前处理方法,特别是在分析血浆和尿液样品时,要特别注意样品的提取与纯化 ,尽量使处理过的样品中杂质如大分子蛋白、有机物等降到更低,保护柱头和柱子。提取纯化好的样品更好用流动相来溶解 ,一方面减少色谱图中的溶剂峰干扰,另一方面也是检查样品在流动相中的溶解性,如果样品进样后在流动相中沉淀,会堵塞进样器和柱头,甚至样品分解,出现怪峰。如果出现样品与流动相不溶要设法改变溶解条件 ,如更换样品溶剂,或改进处理样品的方法,或过滤,去除不溶性物质。

 

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