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有效液相色谱仪系统是解决生化分析的有效途径

2020-02-26

由于有效液相色谱仪具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等众多优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。可以预见的是有效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。

 

液相色谱仪

 

一、有效液相色谱仪检测特点

有效液相色谱仪只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合,HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离HPLC成为解决生化分析问题*有前途的方法。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等;液相色谱-红外光谱连用也发展很快如在环境污染分析测定水中的烃类,海水中的不挥发烃类,使环境污染分析拥有新的发展。

 

液相色谱仪

 

二、有效液相色谱仪分析的流程

由高压泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统,然后输出,经流量与压力测量之后,导入进样器。被测物由进样器注入,并随流动相通过色谱柱,在柱上进行分离后进入检测器,检测信号由数据处理设备采集与处理,并记录色谱图,废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离(极性范围比较宽)还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似,不同的是气相色谱改变温度,而有效液相色谱仪改变的是流动相极性,使样品各组分在**条件下得以分离。

1、*,液体对于气体是有一定的溶解度的。液体的压力越高,对气体的溶解度越好。所以,当一瓶未开封静置的可乐,你是看不到气泡的,因为气泡都溶解在里面了。当你开启瓶盖,直接的影响就是瓶子里面的压力降低了,对气体的溶解度变小,所以气体就析出变成一个个的小气泡。

2、喝过啤酒或者碳酸饮料的人都有这样的经历,当你摇晃瓶子,然后瞬间把瓶盖开启,啤酒或碳酸饮料瓶中会喷出大量泡沫,摇晃的越剧烈,喷射的越猛,不难看出,溶解气体的液体在振荡和运动过程中,也容易让气泡析出。

3、我们曾经怀疑过一个问题:把一升甲醇倒进一生纯水里面,有效液相色谱仪的体积是不是两升?当我们亲自试验后,就排除了这个疑问,而且我们可以明显看到,当两种液体混合的时候,会有大量的气泡冒出,体积也小于两升。

 

液相色谱仪

 

三、有效液相色谱的研究动向

1、缩短分析时间,提高分离效率。应用先进的检测仪器和方法,对流动相、固定相进行调节或改变,采用梯度洗脱、柱切换技术有望解决这个问题。梯度洗脱的有效液相色谱法,能分析较宽极性范围的样品,较等度洗脱具有很大的优势,但对于成分更复杂、极性范围更宽的中药样品则有些力不从心。多柱有效液相色谱法又称多维有效液相色谱法。除具有梯度洗脱一样的改变流动相浓度的优点外,还可以改变固定相种类、键合度、粒径、柱长、柱径等及流动相种类、浓度等。

2、进一步向自动化、智能化及联用技术上发展。液相色谱与质谱联用在国外已成为测定低浓度生物药品中药物及代谢物的**方法,LC-MS-MS法测定血浆中HIV-1蛋白酶,准确有效,血浆中残留的内源性组份和其他药物不干扰测定,既节省材料又节约时间。已经应用于体液、血浆、血清中的药物分析。中药复方注射液“清开灵”中的胆酸类物的分析采用液质联用,效果理想。有效液相色谱-核磁共振联用在药物分析方面的作用也更加清晰。新近提出的智能多柱有效液相色谱系统利用切换技术的模块式分离性能,把样品分块的切换进不同性质的色谱柱,再用合适的流动相洗脱,全过程采用智能化自动控制,分析效果良好。

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