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液相色谱仪色谱柱安装和使用说明大全!


发布日期:[2019-03-06] 共阅[67]次

hplc分析是系统的工作,每个环节都非常重要;看似简单的环节容易被忽略,导致整个实验结果的偏差,所以养成良好的习惯是很重要的。色谱柱是色谱系统的核心。正确安装和使用液相色谱柱是色谱工作的关键。这也是获得正确可靠的实验数据的必要途径。

一、液相色谱仪色谱柱的安装

1.液相色谱柱结构:

a.空柱由柱节点、柱管和柱管组成。

柱接头构造成具有低死体积。柱接头是螺纹端。末端为7/16英寸外螺纹,另一端为3/16英寸内螺纹(国内外标准化)。 7/16英寸外螺纹连接到1/4英寸柱管(¢6.35mm),带有压力环以进行密封。 3/16英寸内螺纹连接到1/16英寸(¢1.57mm)连接管,并且在用于柱接头的密封件之间还设置有压力环。为了尽量减少色谱柱外的死体积,在安装色谱柱时,使用¢1.57mm的连接管将空心螺丝插入环中,然后拧紧空心螺丝。压环通过空心螺钉压紧变形,然后悬挂在连接管上(连接管通过压环后暴露的管长应严格控制在2.5mm长或其他固定尺寸。

将不锈钢过滤器(或过滤网)放置在管的两端,位于管柱两端的接头处,以密封管柱填料,使其不被流动相冲出管柱。空塔的每个部件都由316不锈钢制成,能够承受一般的溶剂作用。但是,含氯化物的溶剂具有一定的腐蚀性,因此需要注意的是,这些溶剂不能长期保留在柱和连接管中,以避免腐蚀。

b.柱填料:

在填料和流动相之间进行液相色谱柱的分离,柱的分类依据填料的类型。

正相柱:硅胶为填料。按其形状可分为非晶型和球型,其粒径在3~10µm之间。另一种正相填料是硅胶表面键合-CN、-NH2等官能团,即所谓的键合相硅胶。

反相柱:硅胶上键合的非极性官能团(ODS)填料.也有非中性和球状的.其他常用的粉末冶金产品有C8,C4,C2,B等。粒径在3~3之间.

2.色谱柱的安装

一个。打开色谱柱包装并确认色谱柱中的色谱柱类型,尺寸,生产日期和溶剂。

b.拧下柱两端的密封塞,放回填料箱备用。

c.根据气缸上指示的流动方向,通过连接管道将柱的进口端与进料阀的进口端连接起来(如果条件允许,建议使用柱前的保护柱);柱的出口与探测器相连。连接管为不锈钢管,外径57毫米,内径0.1毫米-0.3毫米。连接管的两端都有中空的螺丝和密封用的压力圈。接管时,你必须尽量减少列外的死量。然后顺时针拧紧中空螺丝,直到无法拧紧为止。然后继续用扳手顺时针方向拧1/4-1/2圈。别太用力。如果柱经流相加压后出现夜间渗漏,请顺时针旋转1/4圈,用扳手扳到夜间不漏夜为止。

ii.液相色谱柱的使用:

在使用该列之前,更好测试该列的性能,并将结果保存为评估该列未来性能变化的参考。然而,应该指出,该柱的性能可能因所使用的样品、流动相和柱温而有所不同。此外,只要测试结果具有可比性,就会根据列工厂报告中的条件(工厂测试中使用的条件是更好条件)进行柱性能测试。

1.样品的前处理:

一个。更好使用流动相来溶解样品。

b.用预处理柱去除样品中极性强的杂质或用柱填料不可逆地吸附杂质。

c.使用0.45微米的滤膜去除微粒杂质。

2.流动相的配置:

液相色谱是指样品组分在柱填料和流动相之间进行质量交换,以达到分离的目的。因此,流动相必须具有以下特性:

a.流动相对于样品有一定的溶解能力,以确保样品组分不会在柱内(或长时间停留在柱内)。

湾流动相有些惰性,不会与样品发生化学反应(特殊情况除外)。

c.流动相的粘度应尽可能小,以便在使用较长的分析柱时获得良好的分离效果;同时,应降低柱的压降,延长液压泵的使用寿命(流动相的粘度可通过运行方法降低)。温度升高的OD)。

d.流动相的化学性质应与使用的探测器相容。如果使用紫外探测器,更好使用低紫外吸收的溶剂。

e.流动相的沸点不宜过低,造成气泡的形成,导致实验无法进行。

f.在配置移动阶段之后,必须对其进行调整。去除流动相中溶解的微量气体不仅有利于检测,而且可以防止流动相中微量氧与样品的相互作用。

3.流动相流速的选择:

由于柱效应是柱内流动相线性流速的函数,不同流速下可获得不同的柱效应。对于特定的色谱柱,更好流速是追求更好柱效的更好流速。对于内径为4.6 mm的柱,流速一般为1 ml/min;对于内径为4.0 mm的柱,流速更好为0.8 ml/min。

选择更好流速时,可以延长分析时间。

注意:

1).由于甲醇的低成本,建议将甲醇系统用于反相柱(除非必须使用乙腈)。

2).普通相柱建议采用石油醚或精制馏分作为流动相,沸点为30℃60℃,不采用纯馏分。更好使用超纯水(电阻率>18万亿),纯水和双纯水中含有杂质,这可能影响分析结果。

3)。含水流动相优选在实验前制备,特别是在夏季,当缓冲溶液用作流动相时,不要保持过夜。更好加入diedan化钠以防止细菌生长。

4。流动相需要0.45um膜过滤以去除颗粒杂质。

(见第5段)。采用高效液相色谱法对流动相进行配置,采用合适的流动相可延长柱的使用寿命,提高柱的性能。

4.柱性能的测试:

——启动液相色谱仪:

a.流动相流速为1ml/min。

探测器波长设置为254 nm。

使用流动相组成和测试样品用于工厂测试。

--记录并计算测试结果。

 
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