hplc分析是系统的工作，每个环节都非常重要；看似简单的环节容易被忽略，导致整个实验结果的偏差，所以养成良好的习惯是很重要的。色谱柱是色谱系统的核心。正确安装和使用液相色谱柱是色谱工作的关键。这也是获得正确可靠的实验数据的必要途径。

一、液相色谱仪色谱柱的安装

1.液相色谱柱结构：

a.空柱由柱节点、柱管和柱管组成。

柱接头构造成具有低死体积。柱接头是螺纹端。末端为7/16英寸外螺纹，另一端为3/16英寸内螺纹（国内外标准化）。 7/16英寸外螺纹连接到1/4英寸柱管（¢6.35mm），带有压力环以进行密封。 3/16英寸内螺纹连接到1/16英寸（¢1.57mm）连接管，并且在用于柱接头的密封件之间还设置有压力环。为了尽量减少色谱柱外的死体积，在安装色谱柱时，使用¢1.57mm的连接管将空心螺丝插入环中，然后拧紧空心螺丝。压环通过空心螺钉压紧变形，然后悬挂在连接管上（连接管通过压环后暴露的管长应严格控制在2.5mm长或其他固定尺寸。

将不锈钢过滤器（或过滤网）放置在管的两端，位于管柱两端的接头处，以密封管柱填料，使其不被流动相冲出管柱。空塔的每个部件都由316不锈钢制成，能够承受一般的溶剂作用。但是，含氯化物的溶剂具有一定的腐蚀性，因此需要注意的是，这些溶剂不能长期保留在柱和连接管中，以避免腐蚀。

b.柱填料：

在填料和流动相之间进行液相色谱柱的分离，柱的分类依据填料的类型。

正相柱：硅胶为填料。按其形状可分为非晶型和球型，其粒径在3~10µm之间。另一种正相填料是硅胶表面键合-CN、-NH2等官能团，即所谓的键合相硅胶。

反相柱：硅胶上键合的非极性官能团(ODS)填料.也有非中性和球状的.其他常用的粉末冶金产品有C8，C4，C2，B等。粒径在3~3之间.

2.色谱柱的安装

一个。打开色谱柱包装并确认色谱柱中的色谱柱类型，尺寸，生产日期和溶剂。

b.拧下柱两端的密封塞，放回填料箱备用。

c.根据气缸上指示的流动方向，通过连接管道将柱的进口端与进料阀的进口端连接起来(如果条件允许，建议使用柱前的保护柱)；柱的出口与探测器相连。连接管为不锈钢管，外径57毫米，内径0.1毫米-0.3毫米。连接管的两端都有中空的螺丝和密封用的压力圈。接管时，你必须尽量减少列外的死量。然后顺时针拧紧中空螺丝，直到无法拧紧为止。然后继续用扳手顺时针方向拧1/4-1/2圈。别太用力。如果柱经流相加压后出现夜间渗漏，请顺时针旋转1/4圈，用扳手扳到夜间不漏夜为止。

ii.液相色谱柱的使用：

在使用该列之前，更好测试该列的性能，并将结果保存为评估该列未来性能变化的参考。然而，应该指出，该柱的性能可能因所使用的样品、流动相和柱温而有所不同。此外，只要测试结果具有可比性，就会根据列工厂报告中的条件(工厂测试中使用的条件是更好条件)进行柱性能测试。

1.样品的前处理：

一个。更好使用流动相来溶解样品。

b.用预处理柱去除样品中极性强的杂质或用柱填料不可逆地吸附杂质。

c.使用0.45微米的滤膜去除微粒杂质。

2.流动相的配置：

液相色谱是指样品组分在柱填料和流动相之间进行质量交换，以达到分离的目的。因此，流动相必须具有以下特性：

a.流动相对于样品有一定的溶解能力，以确保样品组分不会在柱内(或长时间停留在柱内)。

湾流动相有些惰性，不会与样品发生化学反应（特殊情况除外）。

c.流动相的粘度应尽可能小，以便在使用较长的分析柱时获得良好的分离效果；同时，应降低柱的压降，延长液压泵的使用寿命（流动相的粘度可通过运行方法降低）。温度升高的OD）。

d.流动相的化学性质应与使用的探测器相容。如果使用紫外探测器，更好使用低紫外吸收的溶剂。

e.流动相的沸点不宜过低，造成气泡的形成，导致实验无法进行。

f.在配置移动阶段之后，必须对其进行调整。去除流动相中溶解的微量气体不仅有利于检测，而且可以防止流动相中微量氧与样品的相互作用。

3.流动相流速的选择：

由于柱效应是柱内流动相线性流速的函数，不同流速下可获得不同的柱效应。对于特定的色谱柱，更好流速是追求更好柱效的更好流速。对于内径为4.6 mm的柱，流速一般为1 ml/min；对于内径为4.0 mm的柱，流速更好为0.8 ml/min。

选择更好流速时，可以延长分析时间。

注意：

1).由于甲醇的低成本，建议将甲醇系统用于反相柱(除非必须使用乙腈)。

2).普通相柱建议采用石油醚或精制馏分作为流动相，沸点为30℃60℃，不采用纯馏分。更好使用超纯水(电阻率>18万亿)，纯水和双纯水中含有杂质，这可能影响分析结果。

3）。含水流动相优选在实验前制备，特别是在夏季，当缓冲溶液用作流动相时，不要保持过夜。更好加入diedan化钠以防止细菌生长。

4。流动相需要0.45um膜过滤以去除颗粒杂质。

（见第5段）。采用液相色谱法对流动相进行配置，采用合适的流动相可延长柱的使用寿命，提高柱的性能。

4.柱性能的测试：

——启动液相色谱仪：

a.流动相流速为1ml/min。

探测器波长设置为254 nm。

使用流动相组成和测试样品用于工厂测试。

--记录并计算测试结果。