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液相色谱法检测牛奶分析研究

2010-08-16

随着抗生素在乳畜饲养业中的广泛应用,牛奶中抗生素残留问题日趋受到社会的重视。对此,检测技术也迅速发展,以寻求简便、快速、准确、敏感性高的检测方法满足日趋严格的残留限量的要求,保障人们饮用牛奶的卫生和安全。     

    1 牛奶中抗生素残留的来源及其危害

1 .1牛奶中抗生素残留的危害      
    牛奶是老少皆宜的营养品,牛奶中若含有抗生素,对长期饮用者来说无疑是等于长期服用小剂量的抗生素,对抗生素有过敏体质的人服用残留抗生素的乳后会发生过敏反应。即使是正常饮用者,体内的某些条件性致病菌易产生耐药性,一旦患者再用同种抗生素治疗很难奏效。

    这又促使临诊兽医在治疗过程中加大抗生素的用量。此外,牛奶中抗生素残留会影响奶制品的品质,如果用含抗生素的奶做酸奶或乳酪等,则残留在其中的抗生素会抑制细菌的发酵,使产量和质量降低。因此市场不允许出售抗生素残留过量的牛奶,这样也造成牛奶生产者的经济损失。    
    1.2 牛奶中抗生素残留的来源      
    一般认为,对泌乳牛用药不当或不注意安全时间是牛乳中抗生素残留的重要因素,尤其是使用乳房灌注法治疗乳腺炎时,易造成牛乳中抗生素残留。随着畜牧业的发展,在牛饲料中添加饲料添加剂已十分广泛,其中含量有一定比例的抗生素,主要作用是预防疾病的发生,这也是牛乳抗生素残留重要原因。此外,在高温季节,一些不法交奶户为防止乳的酸败,往往向牛乳中掺杂各种抗生素,这也是乳中抗生素残留的一个来源。  
 
    2 牛奶中的抗生素残留检测方法研究进展   
    2.1微生物检测法   
    微生物检测法是应用较广泛的方法,如纸片法、TTC法等等,因其测定原理基于抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,因而与临床应用的要求一致,但其测定时间长且结果误差较大。目前趋向灵敏、准确、简便、快速的微生物检测方法研究,如酶标抗体检测法等。  
    2.1.1纸片法   
    纸片法,即PD法(Paper Disc)。常用的纸片法有枯草杆菌纸片法和嗜热脂肪杆菌纸片检测法。这两种方法主要用来检测牛奶中的β-内酰胺类抗生素,其操作过程基本相同,而选用的菌种不同。枯草杆菌纸片法检测的结果易出现假阳性,为了确定阳性物质是否为青霉素(或β-内酰胺类),对加热后的乳样用青霉素酶处理,以灭活乳样中的青霉素。然后再行检测,检测限可达0.01IU/mL。而嗜热脂肪杆菌纸片检测法不仅用于检测奶样中β-内酰胺类抗生素,并能暗示是还存在其他抑菌物质,检测限可达0.008IU/mL以下。一般在4h内即可获得有关乳中是还存在β-内酰胺抗生素残留的结果。因此,在实践中,嗜热脂肪杆菌纸片法在奶样的检测中比枯草杆菌纸片法应用更为广泛。1991年,神保胜彦对纸片法作了进一步研究和改进。改进后的方法不仅能够确定抗生素的种类,而且提高了检出率和准确率,对氯霉素更低检出量0.01ppm,土霉素0.05ppm,链霉素1ppm,红霉素0.05ppm,青霉素0.0025ppm。 
    2.1.2 TTC法   
    TTC法,即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride),这是目前我国食品卫生标淮中规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法(GB5409?85)。如果牛乳中有抗生素存在,当乳中加入菌种(嗜热链球菌)经培养后,菌种不增殖,此时加入的TTC指示剂不发生还原反应,所以仍呈无色状态;如果没有抗生素存在,则加入菌种即行增殖,TTC还原变成红色,使样品染成红色,即牛乳的颜色不变为阳性,染成红色为阴性。检测各种抗生素的灵敏度(更低检出量):青霉素0.004U/ml,链霉素0.5 U/ml,庆大霉素0.4 U/ml,卡那霉素5 U/ml。   
    一些文献报道了我国标TTC法测定的我国部分地区市售牛乳中抗生素残留的情况。1988年,周树南[6]对江苏省8市10个牧场生奶、消毒牛奶和奶粉中抗生素残留情况进行调查,结果发现生奶阳性率3.6%,消毒牛奶11.4%,奶粉39.58%。

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