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液相色谱仪色谱柱选择思路?


发布日期:[2019-06-10] 共阅[67]次

  关于液相色谱仪做为目前使用次数最多的一种液体检测仪器,对于它大家不应该只是知道液相色谱仪的整提组成部分,还应该知道它的分离部分选择思路这其中就有液相色谱仪色谱柱的选择思路,有兴趣又不知道的客户可以一起来了解一下。

  这里为大家提供一个液相色谱仪色谱柱选择的简单思路:

  1.确定分离目的确定你的应用是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命,低的实验成本等。

  2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质诸如化学结构、溶解性、稳定性等。

  3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。

  想要选适合的液相色谱柱,你需要先详细了解它。这样才能少走冤枉路!

  液相色谱仪色谱柱的参数——物理性质

  柱长,内径,如250*4.6mm。

  长度的选择:柱越长,总柱效越高(n值越大),柱越长,分析时间也越长。250—300mm是普遍的柱长,实验室一半以上的工作都是采用此规格柱子,一般用来分离l0到50个组份的中等至复杂混合物;500—600mm,要求较高分辨率的应用,—般用来分离大于50个组份或包含有难分离物质的复杂样品程序升温分析。

  内径:柱效率与柱半径平方成反比,内径越小柱效越高,但内径越大,柱容量也增加,允许进样量就越多。当进样量超过柱容量时,则因柱内每块理论板内不能建立真正的平衡,将会导致色谱蜂畸变,柱分辨率降低,重现性不好。因此对于复杂样品需要准确分离,应使用小内径柱子。另一方面若样品中存在具有很不相同浓度组份化合物,为了增加样品容量就应使用内径大的柱子,目前实验室使用常见的柱子内径一般是4.6mm。

  一般选择原则:分析大分子量化合物选择大孔径色谱柱;对于高pH值或者碱性化合物需要选择高封端或者特殊封端的色谱柱,以改善峰形,延长色谱柱使用寿命等。

  粒径,影响色谱分离度。

  粒径越小柱效越高、分离度越高,但同时会导致较高柱压降。选择1.5-3μm的填料以解决一些复杂样品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒径的填料用作半制备或制备柱。

  孔径和比表面积

  孔径,60A,120A,300A等。孔径小,则含孔率高,比表面积大,载碳量高;色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配,保证分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配,通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上,一般小分子使用80—120A,大分子使用300A。

  比表面积,指的是每克填料的表面积,如180m2/g—350m2/g,与粒度和含孔率有关;比表面积大,会增加样品与键合相之间的反应,增加保留和分离度;比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间,并不是比表面积大或者小就更好,需要选择合适的比表面积。

  孔容和机械强度

  孔容,又称“孔体积”。指单位颗粒的空隙体积大小。它能很好的反应填料的机械强度。孔体积大的填料相对孔体积小的填料机械强度要略弱。孔体积为1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分离,而孔体积大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色谱和低压色谱。

  液相色谱仪色谱柱的参数--化学性质

  填料基质

  硅胶基质:纯度高本钱低,强度大,化学修饰轻易,但pH值范围有限。大多硅胶基质填料在pH2-8之间稳定,但经过特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。

  聚合物基质:应用pH值范围宽,温度稳定(高温可以达到80度以上),机械强度小。

  含碳量

  含碳量指的是硅胶表面键合相的比例,与比表面积和键合覆盖度等有关。高含碳量进步柱容量、分辨率及分析时间,用于要求高分离度的复杂样品;低含碳量分析时间短、展现不同的选择性,用于快速分析简单样品及需要高含水活动相条件的样品。一般C18的含碳量在7-19%不等。

  键合相

  键合试剂不同,对化合物的选择性不同,一般长链的烷基键合相(C18 C8)比短链的(C4 C3)稳定;非极性的键合相比极性的键合相(-NH2)稳定。

  封端

  封端能够降低极性碱性化合物由于与裸露的硅醇基相互作用而产生的拖尾峰。不封端键合相相对封端键合相会产生不同的选择性,尤其是极性样品。

  正相—反相色谱对比

  现在市面上的液相色谱柱琳琅满目,了解色谱柱的参数可以让我们有一个初步的选择,但由于各个仪器厂商的填料技术和键合技术仍有差异,即使都是C18柱,同一品牌不同系列都有不同的功能,有能耐受低pH值的、有耐高温的、有适合碱性样品的等等。所以在选择色谱柱前要好好研究色谱柱参数,仔细阅读色谱柱说明书,才能找到合适的色谱柱和适宜的分离方法。

 
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