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高效液相色谱仪操作步骤及注意事项


发布日期:[2019-05-15] 共阅[104]次

随着高效液相色谱仪在医院的广泛应用一些新手应该对于高效液相色谱仪操作步骤及注意事项不太了解,所以我们瑞析小编为大家准备介绍一下高效液相色谱仪操作步骤及注意事项大家感兴趣的话可以了解一下。

高效液相色谱仪操作步骤

1、开机操作:

(1)、打开电源,用Harb相连接时,注意Harb电源,打开计算机,打开Bootp Server(一般启动时已打开);

(2)、自上而下打开个组件电源,Bootp Server里显示有信号时(有六行字符),打开工作站(先打开On line);

(3)、打开冲洗泵头的10%异丙醇溶液的开关(需用针捅抽),控制流量大小,以能流出的最小流量为准;

(4)、注意各流动相所剩溶液的容积设定,若设定的容积低于最低限会自动停泵,注意洗泵溶液的体积,及时加液;

(5)、使用过程中要经常观察仪器工作状态,及时正确处理各种突发事件。

2、先以所用流动相冲洗系统一定时间(如所用流动相为含盐流动相,必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相),正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯,以延长灯的使用寿命;

3、建立色谱操作方法,注意保存为自己命名的Method,勿覆盖或删除他人的方法及实验结果;

4、使用手动进样器进样时,在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒,洗针液一般选择与样品液一致的溶剂,进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上,并排除针筒中的气泡;

5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎,在更换流动相时注意保护,当发现过滤头变脏或长菌时,不可用超声洗涤,可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤;

6、实验结束后,一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上,再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯;

7、关机时,先关闭泵、检测器等,再关闭工作站,然后关机,最后自下而上关闭色谱仪各组件,关闭洗泵溶液的开关;

8、使用者须认真履行仪器使用登记制度,不要擅自拆卸仪器。

高效液相色谱仪操作注意事项

流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。

流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。

不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。对于柱塞杆外部,做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。

长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相(如甲醇等),因为纯水易长霉。

每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。

C18柱绝对不能进蛋白样品,血样、生物样品。

堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法;①以异丙醇作溶剂冲洗:②放在异丙醇中间用超声波清洗;⑧用10%稀硝酸清洗。

气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

如果进液管内不进液体时,要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。

要注意柱子的pH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。

更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗,然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

有了以上关于高效液相色谱仪操作步骤及注意事项的介绍,相信大家也对其有了更多的认识,也更加了解到它的重要性,如果您要了解更多请咨询我们。

 
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