液相色谱仪的品牌和类型很多，使用方法也各不相同。这主要取决于你是哪种类型的液相色谱仪。当你购买设备时，制造商的工程师将培训使用方法。液相色谱与结构仪器相结合是一个重要的发展方向。液相色谱-质谱法（LC-MS）在分析氨基甲酸酯类农药和多核芳香烃等方面引起了广泛的关注。液相色谱-红外光谱法也得到了迅速发展，如环境污染分析法测定水中的碳氢化合物和海水中的非挥发性碳氢化合物，这导致了环境污染分析的新发展。

液相色谱法的使用方法：

内容：

1  开机

1.1  打开电脑。

1.2打开每个液相色谱模块的电源。

1.3双击桌面仪器-联机进入在线界面。

1.4  排气：

1.4.1手动拧下泵上的冲洗阀（逆时针旋转约1圈）。

1.4.2右击“泵”图标区，选择“方法”；“选项，进入泵编辑画面，设定流量：5毫升/分钟（一般为3-5毫升/分钟），点击“确定”。

1.4.3右击“泵”图标，点击“控制……”选项，选择“上”，点击“好”，系统开始冲洗，直到管道中没有气泡（从溶剂瓶到泵入口）。（通常5分钟），开关通道继续冲洗，直到所有通道都没有气泡使用。

1.4.4在泵图标上单击鼠标右键，然后单击方法。选项，设定流量：0ml≤分钟，手动拧紧冲洗阀。

右击泵图标，单击“方法”。“选择，根据方法要求选择合适的流动相比例，设定流速：1.0ml/min。

1.4.6同样，右键单击“柱温控器”，“检测器”图标，单击“方法...”选项，根据方法要求设置温度，波长，点击“控制”选项，“ ON“打开烤箱和探测器。

2  编辑方法

2.1点击“方法”-“编辑完整方法”开始编辑完整方法。

2.2选择“数据分析”以外的三项，并输入下一个选项卡。

2.3方法信息：将方法信息添加到方法注释(例如：这是用于测试！)。转到下一个选项卡。

2.4泵参数设置：按“流量”输入流量，如1.0ml/min，停止时间：如果10 min(停止时间仅为制作样品所需的时间)，按要求选择适当比例的流动相比。如果：水=75/25，A=水，B=75%。去下一个标签。

2.5自动进样器参数设置：选择“针头注射”----您可以输入进样量和洗瓶位置进入下一个选项卡。

2.6柱温箱参数设置：输入所需温度在空白箱下面的“温度”，如：40度。转到下一个选项卡。

2.7紫外探测器参数的设定：在"波长"以下的空白处输入所需的探测波长，如254纳米。单击“确定”。

2.8在“运行时选项表”中，选择“数据获取”，然后单击“确定”。

2.9从“方法”菜单中选择“另存方法”。“输入合法名称，如Test，然后单击OK。”

3  单次采集

3.1从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，选择相应的路径，在“数据文件”中选择“前缀/计数器”，输入样品瓶的位置，然后单击“确定”。

3.2基线稳定约10分钟后，从“运行控制”菜单中选择“运行方式”。

4  多次数据采集

4.1根据步骤2编辑完整的方法。

4.2单击“顺序”-“顺序表”，输入“样品瓶”、“样品名称”、“注射次数”，选择适当的“抽样方法”

4.3“序列”-“序列参数”，用于选择保存序列数据的路径(序列自动生成名为“序列名称-时间”的文件夹以保存数据)。通过选择前缀/计数器来保存数据建议。

4.4从“序列”菜单中，选择“将序列另存为...”，输入序列名称，例如“测试”，然后单击“确定”。

4.5从“运行控制”菜单中选择“运行顺序”。

5数据分析(脱机使用)

5.1双击“Instrument-Offline(仪表-脱机)”图标输入的脱机屏幕。

5.2在“查看”菜单上，单击“数据分析”进入数据分析屏幕。

5.3从“文件”菜单中选择“呼叫信号”，然后选择您的数据文件名。单击“确定”，将调用数据。 （如果预先建立标准曲线，则应首先打开浓度较低的标准图。）

5.4频谱优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围”和适当的时间范围中选择“全范围”或“自动范围”，或选择“自定义范围”调整。重复，直到图形的比例合适为止。单击“确定”。

6  积分：

6.1从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，并选择合适的“坡度灵敏度”、“峰值宽度”、“zui峰面积”和“zui峰高度”。单击可自动加载积分参数。

单击左侧的“&Radic；”图标以存储方法中的积分参数并退出Integral事件。

6.3如果积分结果不令人满意，则修改相应的积分参数，直到它们满足为止。

7  标准曲线

7.1单击“校准” - “校准设置”，然后输入“内容单位”。

7.2单击“更正”-“新建更正表单”，然后单击“确定”。输入“复合名称”和“内容”，单击“确定”，并根据提示删除其他组件。

7.3要完成单级修正，如果要增加修正等级，从“文件”菜单中选择“呼叫信号”，选择您的数据文件名（第二个样本），点击“校准”-“添加等级”，单击“确定”。输入“内容”并依次增加校正级别。

8  打印报告

8.1从“报告”菜单中选择“设置报告”选项，在“定量结果”框中单击“量化”右侧的黑色三角形，选择“外部标准方法，其他选项保持不变”，然后单击“确定”。

8.2从“报表”菜单中选择“打印报表”，将报表的结果打印到屏幕上，如果要导出到打印机，则单击报表底部的“打印”按钮。

8.3单击“文件” - “另存为” - “方法”以保存数据分析方法。可以直接在“文件” - “调用” - “方法”下调用下一个分析。 （调用的方法包括积分法，标准曲线法和打印报告法）

9  关机

9.1停机前，关闭紫外线灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）冲洗系统约30分钟。（色谱柱zui终应储存在甲醇或乙腈中）

9.2退出化学工作站，在提示时关闭泵和其他窗口，并关闭计算机。

9.3关闭每个模块的1260电源开关。

10  其它注意事项

10.1当样品运行时，不要在自动复核前打开盖子，否则取样过程将停止。

10.2当系统泄漏时，机器将检测并停止注射，状态指示灯将为红色。检查干燥并放置泄漏，干燥泄漏传感器，单击ON按钮，系统重新初始化。

10.3注意紫外线灯的使用寿命。切勿来回切换紫外线灯。

液相色谱法只要求样品可以制成溶液，而不受样品的挥发性的限制。因此，可以分离热不稳定和非挥发性、解离和非解离物质以及各种分子量范围。在样品预处理的同时，hplc实现了高分辨率和高灵敏度，从而可以分离并同时确定性质非常相似的物质，并能在复杂的相体中分离痕量成分。随着固定相的发展，在充分保持生化物质活性的条件下完成液相色谱的分离是解决生化分析问题的一种有希望的方法。由于液相色谱具有分辨率高、灵敏度高、速度快、色列可重复使用、流出部件容易收集等优点，广泛应用于生物化学、食品分析、医学研究、环境分析、以及无机分析。